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] 在，陛下。
去清点一下我们的生物反应器库存。我要知道，我们最多能同时运行多少组动物细胞培养。
三天后，Western blot显示有目标条带，分子量大概一百二十千道尔顿，跟天然蛋白差不多。
严冰像伺候祖宗一样伺候着它们，每天早中晚三次观察细胞形态，记录生长曲线，调整培养基配方。
但活性对，活性比对什么都重要。
CHO细胞的实验，比前段时间的更复杂和耗费精力。
CHO细胞。中国仓鼠卵巢细胞，哺乳动物表达系统，糖基化跟人最接近，折叠环境也最理想。
那就不用大肠杆菌，用酵母。
那就再换，换昆虫细胞，换转基因植物，换化学合成。一条路不通，就走另一条呗。这个伟大的、人类追求了千百万年的项目，我们已经走了一半，不管怎么样，我们都要走下去。
第一，用毕赤酵母表达伴生蛋白全长序列，看能不能拿到有活性的产物。第二把蛋白拆开，看看生命素到底藏在哪一段里。
如果生命素不是蛋白的一部分呢？严冰反问，如果它只是被蛋白包裹的一种小分子，比如某种脂类或者短肽，那酵母就算表达了蛋白，也产不出生命素。
实验一开始，进行得并不顺利，磕磕碰碰的，但毕赤酵母表达系统确实运转起来了。
很多时候，生物实验跟精细化学实验有不少相同的地方，王铭泽的技术能力很高，他可以在制定合成路径时提供参考意见。
就算知道结构，我们也没办法啊。这种蛋白在体外表达，大概率会折叠错误。大肠杆菌那种环境，连糖基化都做不了，更别说形成正确的二硫键了。
不是嵌进去，王铭洋纠正他，是让酵母自己合成。如果生命素是这条蛋白链的一部分，或者是由这条蛋白链加工而来的，那只要让酵母表达正确的蛋白，它自然会带着生命素一起出来。
“辛苦你了。”
包涵体……毕赤酵母的内质网压力太大，蛋白没折叠好就分泌出来了。
收到，陛下，您稍等。
有聚集体。蛋白折叠错了，形成了无活性的包涵体。你纯化的时候只看了分子量，没看构象。
对。酿酒酵母，或者毕赤酵母。它们是真核生物，有内质网，有高尔基体，能做翻译后修饰。虽然比哺乳动物细胞粗糙，但比大肠杆菌强得多。而且它们长得快，成本低。就像个听话的打工人，让它生产什么就生产什么。
严冰盯着检测报告，手指把印有检测结果的纸捏得皱巴巴的，实验结果很不理想
那就做两组实验吧，王铭洋思考后说道。
CHO细胞培养需要血清，需要二氧化碳培养箱，需要贴壁培养或者复杂的悬浮培养系统。一升培养液的成本是酵母的五十倍，甚至一百倍。而且表达量通常很低，可能每升只有几十微克。
出来了！表达量还不低，每升培养液大概有……五毫克！
严冰脸色一红，飞快抓过试管将它塞进离心机，调到一万转离心十分钟。果然，管底出现了一小团白色沉淀。
接来下，王铭洋把堂哥叫了过来，三个人在实验室里，就如何合成生命素做了大量谈论，最后终于把方案定下来。
严冰在T-07和另外两台机器人的帮助下，把伴生蛋白的基因序列克隆进pPICZα载体，电转化进酵母细胞，用甲醇诱导表达。
用胰蛋白酶、糜蛋白酶、V8蛋白酶，分别切割伴生蛋白，然后用质谱追踪每一段的分子量。哪一段里还有生命素的活性，哪段就是关键。
严冰认真考虑后说：
王铭洋的话，让严冰深吸一口气，甚至因为吸得太猛，导致她剧烈地咳嗽起来，王铭洋贴心的靠上去，用手心轻轻的给她顺着气。。。
这个伴生蛋白是三聚体结构，三个亚基通过二硫键连接，生命素的结构就藏在它们中间，就像核桃壳里的核桃仁，我们需要把它先识别出来。
毕赤酵母，我们确实有表达载体，但从来没做过这么复杂的蛋白。三个亚基，还要形成正确的二硫键，还要把生命素嵌进去……
嗯，那我去准备CHO细胞。
因为CHO细胞很娇贵，它们需要三十七度的恒温，百分之五的二氧化碳，还有昂贵的胎牛血清。
不是猜测，是肯定，王铭洋把纸翻过来，在背面画了一个草图，是三个圆圈，接着王铭洋画线将它们连起来，继续说道：
酵母？
什么？
而且，王铭洋补充道，糖基化模式可能也不对。伴生蛋白上有四个N-糖基化位点，酵母的糖基化是高甘露糖型的，跟哺乳动物不一样。也许生命素的活性需要特定的糖链结构维持。
你看这里，王铭洋指了指试管底部，那里有一层几乎不可见的絮状物。
酶切，王铭洋肯定说道：
半个月，白干了。如果酵母不行，那大肠杆菌更不行，只剩下……严冰的声音闷闷的。
镍柱亲和层析、离子交换、分子筛……一套流程走下来，严冰拿到了一管澄清的蛋白溶液。随后她迫不及待地开始做活性测试，把纯化蛋白加入培养的人类细胞中，等待二十四小时后检测端粒长度。
严冰看着王铭洋的背影，突然意识到他已经做出了某种决定。
不可能，分子量对，Western blot对，为什么没活性？
如果CHO也失败了呢？严冰皱着眉头问道。
王铭洋站在他身后，双手抱胸，表情平静，问道：纯化呢？
生命素的实验，遇到了最大的难题，就像实验室里做出来的某些有价值的东西，量产时难度丝毫不亚于做研究时。
王铭洋拿起那管蛋白溶液，对着灯光晃了晃，皱眉想看一下后说：沉淀。
T-07，王铭洋突然转身说道。
现在马上做。
拆开？
] 在，陛下。
去清点一下我们的生物反应器库存。我要知道，我们最多能同时运行多少组动物细胞培养。
三天后，Western blot显示有目标条带，分子量大概一百二十千道尔顿，跟天然蛋白差不多。
严冰像伺候祖宗一样伺候着它们，每天早中晚三次观察细胞形态，记录生长曲线，调整培养基配方。
但活性对，活性比对什么都重要。
CHO细胞的实验，比前段时间的更复杂和耗费精力。
CHO细胞。中国仓鼠卵巢细胞，哺乳动物表达系统，糖基化跟人最接近，折叠环境也最理想。
那就不用大肠杆菌，用酵母。
那就再换，换昆虫细胞，换转基因植物，换化学合成。一条路不通，就走另一条呗。这个伟大的、人类追求了千百万年的项目，我们已经走了一半，不管怎么样，我们都要走下去。
第一，用毕赤酵母表达伴生蛋白全长序列，看能不能拿到有活性的产物。第二把蛋白拆开，看看生命素到底藏在哪一段里。
如果生命素不是蛋白的一部分呢？严冰反问，如果它只是被蛋白包裹的一种小分子，比如某种脂类或者短肽，那酵母就算表达了蛋白，也产不出生命素。
实验一开始，进行得并不顺利，磕磕碰碰的，但毕赤酵母表达系统确实运转起来了。
很多时候，生物实验跟精细化学实验有不少相同的地方，王铭泽的技术能力很高，他可以在制定合成路径时提供参考意见。
就算知道结构，我们也没办法啊。这种蛋白在体外表达，大概率会折叠错误。大肠杆菌那种环境，连糖基化都做不了，更别说形成正确的二硫键了。
不是嵌进去，王铭洋纠正他，是让酵母自己合成。如果生命素是这条蛋白链的一部分，或者是由这条蛋白链加工而来的，那只要让酵母表达正确的蛋白，它自然会带着生命素一起出来。
“辛苦你了。”
包涵体……毕赤酵母的内质网压力太大，蛋白没折叠好就分泌出来了。
收到，陛下，您稍等。
有聚集体。蛋白折叠错了，形成了无活性的包涵体。你纯化的时候只看了分子量，没看构象。
对。酿酒酵母，或者毕赤酵母。它们是真核生物，有内质网，有高尔基体，能做翻译后修饰。虽然比哺乳动物细胞粗糙，但比大肠杆菌强得多。而且它们长得快，成本低。就像个听话的打工人，让它生产什么就生产什么。
严冰盯着检测报告，手指把印有检测结果的纸捏得皱巴巴的，实验结果很不理想
那就做两组实验吧，王铭洋思考后说道。
CHO细胞培养需要血清，需要二氧化碳培养箱，需要贴壁培养或者复杂的悬浮培养系统。一升培养液的成本是酵母的五十倍，甚至一百倍。而且表达量通常很低，可能每升只有几十微克。
出来了！表达量还不低，每升培养液大概有……五毫克！
严冰脸色一红，飞快抓过试管将它塞进离心机，调到一万转离心十分钟。果然，管底出现了一小团白色沉淀。
接来下，王铭洋把堂哥叫了过来，三个人在实验室里，就如何合成生命素做了大量谈论，最后终于把方案定下来。
严冰在T-07和另外两台机器人的帮助下，把伴生蛋白的基因序列克隆进pPICZα载体，电转化进酵母细胞，用甲醇诱导表达。
用胰蛋白酶、糜蛋白酶、V8蛋白酶，分别切割伴生蛋白，然后用质谱追踪每一段的分子量。哪一段里还有生命素的活性，哪段就是关键。
严冰认真考虑后说：
王铭洋的话，让严冰深吸一口气，甚至因为吸得太猛，导致她剧烈地咳嗽起来，王铭洋贴心的靠上去，用手心轻轻的给她顺着气。。。
这个伴生蛋白是三聚体结构，三个亚基通过二硫键连接，生命素的结构就藏在它们中间，就像核桃壳里的核桃仁，我们需要把它先识别出来。
毕赤酵母，我们确实有表达载体，但从来没做过这么复杂的蛋白。三个亚基，还要形成正确的二硫键，还要把生命素嵌进去……
嗯，那我去准备CHO细胞。
因为CHO细胞很娇贵，它们需要三十七度的恒温，百分之五的二氧化碳，还有昂贵的胎牛血清。
不是猜测，是肯定，王铭洋把纸翻过来，在背面画了一个草图，是三个圆圈，接着王铭洋画线将它们连起来，继续说道：
酵母？
什么？
而且，王铭洋补充道，糖基化模式可能也不对。伴生蛋白上有四个N-糖基化位点，酵母的糖基化是高甘露糖型的，跟哺乳动物不一样。也许生命素的活性需要特定的糖链结构维持。
你看这里，王铭洋指了指试管底部，那里有一层几乎不可见的絮状物。
酶切，王铭洋肯定说道：
半个月，白干了。如果酵母不行，那大肠杆菌更不行，只剩下……严冰的声音闷闷的。
镍柱亲和层析、离子交换、分子筛……一套流程走下来，严冰拿到了一管澄清的蛋白溶液。随后她迫不及待地开始做活性测试，把纯化蛋白加入培养的人类细胞中，等待二十四小时后检测端粒长度。
严冰看着王铭洋的背影，突然意识到他已经做出了某种决定。
不可能，分子量对，Western blot对，为什么没活性？
如果CHO也失败了呢？严冰皱着眉头问道。
王铭洋站在他身后，双手抱胸，表情平静，问道：纯化呢？
生命素的实验，遇到了最大的难题，就像实验室里做出来的某些有价值的东西，量产时难度丝毫不亚于做研究时。
王铭洋拿起那管蛋白溶液，对着灯光晃了晃，皱眉想看一下后说：沉淀。
T-07，王铭洋突然转身说道。
现在马上做。
拆开？
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